Quelle est la fonction d'un tampon de tris dans l'extraction de l'adn?

Tris comme un tampon

• Comme le pH peut influencer et être influencé par un certain nombre de facteurs cellulaires, le maintien d'un pH stable est essentiel à la science expérimentale. Tampons biologiques, comme tris, sont importants car ils peuvent maintenir un pH stable malgré les influences qui pourraient autrement décaler le pH. Tris (hydroxyméthyl) aminométhane, avec un pKa de 8,1, est un tampon efficace entre pH 7 et 9. En raison de sa plage neutre, un tampon tris est couramment utilisé dans les laboratoires biologiques. Cependant, tampon de tris est sensible à la température et doit être utilisé à la température à laquelle il a été à l'origine de la PHED pour éviter inexactitude.

La lyse des cellules

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  Lysis, ou de casser ouvert les cellules, est la première étape d'extraction de l'ADN. Ceci est réalisé par un tampon contenant du Tris et de l'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique). EDTA lie cations divalents tels que le calcium et le magnésium. Comme ces ions permet de maintenir l'intégrité de la membrane cellulaire, les éliminer avec de l'EDTA déstabilise la membrane. Tris est le tampon principal de constituant son rôle principal est de maintenir le pH du tampon à un point stable, généralement 8,0. En outre, le tris interagit probablement avec le LPS (lipopolysaccharide) de la membrane, qui sert à déstabiliser la membrane plus loin.

Tris protège l'ADN à partir des variations de pH

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  Lorsque les cellules sont décomposés, et leur ADN débordent contenu dans le tampon. En outre, la RNase A (détruit l'ARN), des protéases (détruisent les protéines), et SDS (dodécylsulfate de sodium, solubilise les fragments de membrane) sont souvent inclus. Pris ensemble, cette soupe de contenu cellulaire et ARN fragmenté et des protéines peut avoir un grand impact sur le pH de la solution. Parce que l'ADN est sensible au pH, il est important pour les tris pour tamponner la soupe et maintenir le pH à un point d'équilibre.

ADN Percipitation

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  Dans la phase finale de l'extraction d'ADN, l'ADN lui-même est extraite de la solution. A ce point, l'ADN est soluble dans le tampon. Pour extraire de la solution, l'ADN est rendu insoluble par addition d'éthanol ou de l'isopropanol (alcool isopropylique). Lorsque cela est fait, l'ADN devient évidente en solution comme une substance filiforme blanc. Bien que l'ADN peut être isolé à partir des composants cellulaires restants de cette manière, il est «utilisable» quand il est insoluble. Après isolement, on élimine l'alcool, et de l'ADN doit être renvoyé dans un tampon biologique, comme tris, doit être utilisé.

Faites Le Vous Même

• Bien que l'extraction de l'ADN se fait couramment dans les laboratoires de recherche utilisant généralement l'un des un certain nombre de kits disponibles dans le commerce, toute personne peut faire l'extraction d'ADN à la maison en utilisant des articles ménagers courants et les pois verts ou épinards. Dans ce cas, le tris, ni de tampon biologique, ne sont pas présentes pour protéger l'ADN des changements de pH. Cependant, il est un moyen visuel d'aider les étudiants de se connecter avec l'ADN cellulaire.