But de la solution de lyse cellulaire

Les cellules sont les unités structurelles et fonctionnelles de base du corps humain. Ils comportent plusieurs parties différentes appelées organites qui contribuent à la capacité de la cellule à utiliser. L'énergie est fournie par les mitochondries, les protéines sont synthétisées sur des ribosomes, de l'ADN est contenue dans le noyau et ainsi de suite. Si un scientifique est intéressé à étudier un composant particulier d'un de ces organites, il est nécessaire de briser la cellule ouverte, ou lyse il, pour isoler les organites d'intérêt du reste de la cellule.

  1. Lyse cellulaire

  2. Les cellules animales sont liées par une membrane cellulaire semi-perméable. A l'intérieur de la cellule, les organites sont en suspension dans un liquide appelé cytosol, ou le cytoplasme. Le cytosol contient des sucres, des sels, des protéines solubles et les protéines de structure du cytosquelette - une structure qui maintient la forme des cellules. La membrane de la cellule peut être rompu ou lysé, mécaniquement, chimiquement ou par une combinaison des deux. Par lyse chimique, les cellules sont mises en suspension dans une solution qui contient des détergents et / ou d'autres réactifs qui interfèrent avec les liaisons chimiques des protéines membranaires de maintien ensemble. Il en résulte une rupture de la membrane et la libération des composants intracellulaires.

  3. Fractionnement subcellulaire




    • Une fois que les cellules ont été lysées, il est nécessaire de séparer l'organite ou protéine d'intérêt par rapport au reste des composants. Centrifugation différentielle utilise la force de gravité pour des objets distincts par la densité. Tubes à essai contenant des solutions cellulaires sont centrifugés dans une centrifugeuse à progressivement plus élevés RPM (tours par minute), la création d'une pastille ou d'une fraction qui contient les organites les plus lourdes en bas du tube à chaque tour de roue.

    Purification



    • Une fois que la fraction d'intérêt a été obtenue, elle doit être purifiée. Purification élimine les contaminants en exploitant les différences dans les caractéristiques moléculaires, telles que la charge, la forme ou la taille. Par exemple, la fraction d'intérêt peut contenir deux protéines rassemblées en un culot ensemble en raison des similitudes de la densité en dépit du fait qu'ils ont des tailles très différentes. Pour séparer la protéine indésirable de celui à l'étude, il serait logique d'utiliser une autre méthode pour isoler les protéines par taille.

    Pertinence pour les maladies humaines



    • La capacité de lyse des cellules et séparer les composants spécifiques a fourni aux chercheurs médicaux et les développeurs de médicaments avec des indications importantes sur l'épidémiologie de certaines maladies humaines. Par exemple, les membranes des cellules cancéreuses peuvent être comparés à ceux de cellules normales dans le but de développer des traitements qui détruisent les cellules tumorales, mais sont sans danger pour les cellules saines. La lyse des cellules est également utilisée pour étudier la maladie d'Alzheimer, des troubles métaboliques et bien plus encore.

    Considérations

    • Toutes les cellules ne sont pas créés égaux, il est donc important de personnaliser le protocole utilisé pour la lyse des caractéristiques de votre population cellulaire particulier. Il est également important de considérer exactement comment vous envisagez d'étudier la composante d'intérêt. Si vous souhaitez doser l'activité d'une enzyme, il serait illogique d'utiliser une solution capable de détruire la fonction de l'enzyme. Les fabricants de kits de réactifs chimiques utilisés pour la lyse cellulaire sont généralement heureux de vous aider à déterminer vos besoins.

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