Pourquoi le chlorure de magnésium est utilisé dans la pcr?

Imitant le Corps

• La réaction en chaîne par polymérase (PCR) a été développé afin d'imiter propre façon de répliquer l'ADN de la nature. L'ADN est une séquence de répétition de nucléotides, chaque nucléotide et comporte trois parties. L'épine dorsale de l'ADN est une unité de sucre et de phosphate de répéter, et chaque sucre a une base azotée attaché à elle. Il ya quatre guanine bases- azotée, cytosine, adénine et la thymine. ADN constitué de deux brins de phosphate de sucre parallèles les uns aux autres avec deux bases azotées jonction entre tous les deux sucres. Lorsque l'ADN se réplique dans le corps, une enzyme appelée pauses hélicase à part les Obligations entre les bases azotées. Une seconde enzyme, l'ADN polymérase, attache de nouvelles nucléotides à la place des anciens. Enfin, une troisième enzyme appelée ADN ligase rejoint les nouvelles molécules de retour ensemble.

Les composants de réaction PCR

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  Quelques modifications doivent être apportées afin de répliquer l'ADN dans une réaction de laboratoire. Au lieu de hélicase, une réaction PCR utilise simplement la chaleur pour briser les liens entre les bases azotées. ADN polymérase humaine est pas suffisamment stable pour résister à ces températures. Une molécule similaire appelée Taq polymerase, ou la polymérase thermostable est utilisée à sa place, parce qu'il peut résister aux conditions thermiques de PCR. En outre, une réaction PCR nécessite nucléotides libres, un tampon, et magnésium.

Le rôle de Chlorure de magnésium

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  Le chlorure de magnésium est le procédé préféré de l'ajout de magnésium à une expérience de PCR. Polymérase thermostable nécessite la présence de magnésium à agir en tant que cofacteur pendant le processus de réaction. Son rôle est similaire à celui d'un catalyseur: le magnésium est en fait pas consommé dans la réaction, mais la réaction ne peut avoir lieu qu'en présence du magnésium.

Effets de magnésium Abondant

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  Le plus magnésium, qui est ajouté à une réaction de PCR, plus vite la réaction se poursuivre. Cependant, ce ne sont pas nécessairement une bonne chose. Si trop de magnésium est présent, l'ADN polymérase ne fonctionne trop vite et font souvent des erreurs dans le processus de copie. Cela conduira à de nombreux brins d'ADN différents produite qui ne représentent pas nécessairement l'échantillon original qui a été fourni.

Effets de magnésium Scarce

• Si le magnésium est en quantité limitée dans une réaction, il ne sera pas aller aussi vite qu'il devrait le cas échéant. Vous pouvez tenter d'exécuter un cycle PCR 40 mais pas obtenir la quantité de copies que vous le vouliez. Chaque cycle de la PCR double la quantité d'ADN dans le tube à essai de façon exponentielle. Ainsi, alors que vous commencez avec une petite quantité, vous vous retrouvez avec de nombreuses fois ce montant initial à la fin. Si il n'y a pas suffisamment de magnésium, une partie de l'ADN polymérase ne sera pas activé et il ne fonctionnera pas. Cependant, la chaleur aura pris à part l'ADN qui est déjà présent et il ne sera pas rejoint. Par conséquent, toute l'expérience peut être ruinée si il n'y a pas suffisamment de magnésium présente.